Časté problémy, keď ultrazvukový homogenizátor rozbije Escherichia coli

E. coli exprimuje cudzí proteín. Pri sonikácii sa suspenduje v PBS obsahujúcom 1% triton-X-100. Ultrazvukový efekt je lepší. Účinok 1% triton-X-100 je stále zrejmý. Funguje, ako napríklad Streptomyces.

Bakteriálne zrážanie priamo pridajte vzorku 1 pufr, pridajte 5 ml merkaptoetanolu, premiešajte, odstreďte, varte 10 minút, priamo naložte, zafarbite a odfarbte kroky nasledovne: lepidlo vložte do vhodného množstva farbiacej kvapaliny v mikrovlnnej rúre na 1 min, farbenie Roztok sa nahradí veľkým množstvom Voda sa môže variť v mikrovlnnej rúre po dobu 10 minút.

Po expresii rekombinantného proteínu sa bunky rozrušili ultrazvukovou vlnou, použitím ľadového kúpeľa, 400W a 2S sa zastavila na 1S, ale v krátkom čase sa vytvorilo veľké množstvo peny, čo ovplyvnilo účinnosť rozdrvenia. Oba pbs a tris pufre boli rovnaké a nakoniec bolo drvenie neúplné. Ale môj cieľový proteín je v týchto neporušených bunkách, čo ma robí neschopnými získať experimentálne výsledky.

Dovoľte mi, aby som vám analyzoval, prečo táto situácia a riešenie.

1. Bubliny budú generované, pretože vaša poloha sondy nie je umiestnená dobre, sonda musí byť v blízkosti dna, asi 1 cm (som zvyčajne 0,5 cm od dna), prístroj bude mať rôzne úrovne výkonu, ale môžete pozorovať stránky, tam sú výkyvy, ale Nebuďte príliš agresívne.

2. Super 3S zastaví 10S, ultrazvuk asi 20 krát vidieť efekt

3. Dbajte na polohu húkačky. Ak nie ste správny, mali by ste ho nastaviť včas. Okrem toho, z hľadiska koncentrácie baktérií, skúste zvýšiť objem pri drvení, pevnosť by nemala prekročiť 60%.

4. Vyskúšajte 8S pre Super 8S. Pri niektorých bakteriálnych proteínoch je ťažké rozptýliť teplo, čo vedie k denaturácii proteínov a tvorbe bublín. Najlepšie je pozastaviť sa o niečo dlhšie. To je bežnejšie vo forme inklúznych teliesok.