Často kladené otázky o rozbité bunky

1. E. coli vyjadruje cudzie bielkoviny. Keď sonicated, je zavesená v PBS obsahujúcom 1% triton-X-100. Vplyv ultrazvuku je lepšie. Účinok 1% triton-X-100 je stále jasné. Niektoré baktérie aj pracovať, napríklad Streptomyces. Po vyjadrení rekombinantný proteín, bunky stroskotali Ultrazvukový bunky narušenia, pomocou ľadového kúpeľa, 400w, a rozdrvil na 2s 1s, ale veľké množstvo peny bol vygenerovaný v krátkom čase, čo ovplyvnilo tlakovú silu. Pbs a tris nárazníky boli takhle. Je fragmentácia neúplné a cieľový proteín v bunkách neporušené, čo mám robiť?

Analýza: Bublina bude generovať, pretože sondy pozícia nie je umiestnená aj; Sonda musí byť blízko spodnej, asi 0,5-1 cm; výkon sa bude líšiť podľa nástroja, ale hladina kvapaliny možno pozorovať, nie je kolísanie, ale nie príliš silný; môžete vybrať Ultrazvukový bunky Drvič je rozdelené pre 3s pre 10s a rozbité pre 20 - až 30-krát. Pozícia roh tiež poznamenať. Ak zvuk je zle, to je potrebné nastaviť čas; Vzhľadom na koncentráciu baktérií. Skúste zvýšiť objem pri drvenie, sila Zui nesmie presiahnuť 60%; Skúste prestávke 8s 8s, pre niektorých bakteriálnych bielkovín, je ťažké rozptýliť bielkovín spôsobujú denaturáciu bielkovín na výrobu bublín, ktoré môžu byť pozastavené trochu dlhšie. Proteín v podobe Inklúzne telieska.

2. Aké sú podmienky pre ultrazvukom Streptomyces (sú)?

Analytické: sú patria do skupiny grampozitívnou (Eubakterie) vetvenia na strome fylogeneticky prokaryotickom systéme, ktorý má molekulárnej a biologické vlastnosti jedinečné prokaryotes (G + C) molárna percenta (mol %). Avšak, v rôznych skupinách, chemické zloženie bunkovej steny sa značne líši. V E. coli ultrazvuk, 400W sa používa, a spôsob lámanie 5s 5s je účinná, ale používa ho Streptomyces a nemá žiadny účinok z dôvodu rozdiel v zložení bunkových stien. Predbežná spinning liečbu Streptomyces (sú) všeobecne je nakonfigurovaný na určité koncentrácie bakteriálnej suspenzie. Osobitné podmienky pre drvenie pomocou disruptor Ultrazvukový bunky sú: zbieranie baktérií v 24 h riešenie kultúru na 5 000 r / min 5 min zbierať buniek; umývanie s pH 7,5 Na2HPO-NaH2PO medzipamäte 3 krát a potom bunky boli formulované do 1:3 bakteriálnej suspenzie použitím medzipamäte. Umiestnené v 40 mL veľké plastové skúmavky; Umiestnite veľké plastové skúmavky do ľadového kúpeľa a rozdrviť ju s Ultrazvukový bunky disruptorov (výkon 200W, 1/2" sonda, rozdrviť na 30s, občasné 30s); drvenie riešenie 12 000 r/min odstredivky vysokou rýchlosťou 30 min, zbierať bunky trosky a supernatant. Umývanie buniek môže tiež umyť raz predchladeného fyziologickým roztokom alebo Tris-HCl pri pH 8. Okrem toho Ultrazvukový dávku značne líši s množstvo vzorky a baktérie. Výkon môže byť 400-600w, zdrvený 5s, zastavil na 5s, ľadového kúpeľa a Konečná koncentrácia 1 mM PMSF je pridaný. S cieľom určiť vhodné ultrazvukové intenzitu a frekvenciu, je potrebné skontrolovať, či baktérie sú úplne rozbité kedykoľvek.